polyakrylamidovom gélu je pripravený s otvormi v ňom . Tento gél je tvorený naliatím roztoku horúcej kvapalné polyakrylamidovom do plytkej krabice . Krabica by mala obsahovať comblike štruktúru zubov , ktoré ukazujú dole do roztoku . Polyakrylamidovom gélu sa stane ihneď potom, čo je vyliata a hrebeň je možné odhaliť obdĺžnikové otvory .
Dodecylsulfát sodný ( SDS )
proteín sa spracuje dodecylsulfát sodný ( SDS ) , aby sa denaturáciu podjednotky veľkého proteínu , takže každý z nich môže byť meraná samostatne . Medzi výhody tohto je, že SDS poskytuje polypeptidy záporný náboj, takže sa budú migrovať smerom k zápornej koncu , alebo anódy , gélu . Za druhé , SDS zaisťuje, že všetky podjednotky bude mať rovnaký náboj, a preto budú všetky migrujú v géle podľa ich molekulovej hmotnosti , miesto poplatkov .
Doplnenie bielkovín
malé množstvo DNA alebo proteínu je umiestnená v jednom z obdĺžnikových otvorov na jednom konci gélu . Elektrický prúd preteká z gélu pri neutrálnom pH . Asi 10 ul DNA rebríka , ako aj dva ovládacie prvky sú tiež vložené do gélu . DNA rebrík slúži na zmeranie ako ďaleko vzorky pohyboval v procese elektroforézy .
Elektroforéza
Stroj potom sa otočil na 100 voltov a nechať bežať po dobu 30 minút . Potom, čo boli vzorky podrobené elektroforéze po dobu 30 minút , gélu spolu s podnosom sa odstráni a umiestni do zásobníka na farbenie asi tri minúty. Potom nasleduje umiestnením gélu v teplej vode po dobu piatich minút . Gél je teraz pripravený na uvedenie na svetelné pole, aby bolo možné pozorovať pohyb fragmentov DNA .
Ďalšie úvahy
Pri prezeraní gél pod svetlá niektoré dôležité veci by mali byť vzaté do úvahy . Bunka môže byť buď heterozygotná alebo homozygotná pre gén v závislosti na tom, či je prítomná alebo nie je prítomná v oboch kópií , alebo len v jednej kópii . Heterozygotná výsledok sa môže objaviť ako jediného pásu , pretože sa segmenty DNA , ktoré sú zosilnené efektívnejšie tmavšie v géle . Farbivo je tiež pridaná , takže každý polypeptid môže byť videný počas a po elektroforéze .