Kirby-Bauerova technika je štandardná mikrobiologická metóda používaná na stanovenie citlivosti baktérií na antimikrobiálne látky. Zahŕňa meranie zóny inhibície rastu baktérií okolo diskov impregnovaných antibiotikami umiestnených na agarovej platni naočkovanej testovacím organizmom. Tu sú všeobecné kroky techniky Kirby-Bauer:
1. Príprava inokula :
- Získa sa čistá kultúra testovaného bakteriálneho kmeňa a pestuje sa vo vhodnom živnom médiu, aby sa dosiahla logaritmická rastová fáza (zákal).
- Bakteriálna suspenzia je štandardizovaná na špecifický zákal, typicky ekvivalentný štandardu zákalu 0,5 McFarlanda, aby sa zabezpečila konzistentná hustota inokula.
2. Inokulácia agarovej platne :
- Na test sa použijú sterilné agarové platne obsahujúce Mueller-Hintonov agar alebo iné vhodné agarové médium.
- Pomocou sterilného vatového tampónu sa štandardizované inokulum rovnomerne rozprestrie po povrchu agarovej platne, aby sa vytvoril súvislý trávnik rastu baktérií.
- Naočkovaná platňa sa nechá niekoľko minút vyschnúť, aby absorbovala prebytočnú vlhkosť.
3. Aplikácia Antibiotických diskov :
- Sterilné antibiotické disky obsahujúce špecifické koncentrácie antimikrobiálnych činidiel sa umiestnia na povrch agarovej platne v rovnomerných intervaloch pomocou sterilných klieští alebo diskového dávkovača.
- Disky sú jemne stlačené, aby sa zabezpečil dobrý kontakt s povrchom agaru bez poškodenia diskov.
4. Inkubácia :
- Inokulovaná platňa s antibiotickými diskami sa inkubuje pri vhodnej teplote (zvyčajne 35 – 37 °C) počas špecifikovaného obdobia (zvyčajne 16 – 24 hodín), aby sa umožnil rast baktérií a difúzia antimikrobiálnych látok.
5. Meranie inhibičných zón :
- Po inkubácii sa platne skúmajú na prítomnosť inhibičných zón okolo antibiotických diskov.
- Pomocou pravítka alebo digitálneho posuvného meradla sa meria priemer každej zóny inhibície v milimetroch.
- Priemer zóny udáva citlivosť testovaného organizmu na špecifické antibiotikum.
6. Interpretácia výsledkov :
- Namerané priemery zón sa porovnávajú so štandardizovanými tabuľkami alebo usmerneniami, ako sú tie, ktoré poskytuje Inštitút pre klinické a laboratórne štandardy (CLSI), aby sa určila citlivosť alebo rezistencia testovaného organizmu na testované antimikrobiálne látky.
- Organizmy sú kategorizované ako citlivé, stredne odolné alebo rezistentné na základe veľkosti inhibičných zón a stanovených interpretačných kritérií.
7. Kontrola kvality :
- Na zabezpečenie presnosti a spoľahlivosti Kirby-Bauerovej techniky sú do každej testovacej série zahrnuté kmene na kontrolu kvality so známymi vzormi citlivosti na monitorovanie účinnosti metódy a použitých činidiel.
Je dôležité dodržiavať štandardizované postupy a interpretovať výsledky podľa zavedených smerníc, aby ste získali spoľahlivé a klinicky relevantné informácie z testovania citlivosti na antibiotiká Kirby-Bauer.