Čarodejnice sú prvýkrát predstavené v 1. akte, scéna 3, keď sa na vresovisku stretnú s Macbethom a Banquom. Vítajú Macbetha tromi proroctvami:že sa stane Thanom z Cawdoru, Thanom z Glamis a kráľom Škótska. Banquo má tiež tri proroctvá, ale nie sú také konkrétne. Proroctvá čarodejníc zasiali do Macbethovej mysle semená ctižiadostivosti a on začne plánovať, ako ich naplniť.
Čarodejnice sa opäť objavia v 3. akte, scéna 5, keď ich Macbeth navštívi v ich jaskyni. Ukazujú mu sériu vízií, ktoré predstavujú jeho budúcnosť a dôsledky jeho činov. Čarodejnice tiež povedia Macbethovi, že ho porazí "Birnam Wood" a "muž nenarodený zo ženy." Tieto proroctvá vedú Macbetha k presvedčeniu, že je neporaziteľný a v honbe za mocou sa stáva ešte bezohľadnejším.
Čarodejnice zohrávajú v Macbethovom páde kľúčovú úlohu. Dávajú do pohybu udalosti, ktoré vedú k jeho zničeniu, a poskytujú mu falošný pocit bezpečia, ktorý v konečnom dôsledku vedie k jeho porážke. Čarodejnice sú mocná a nebezpečná sila a predstavujú temnú stránku ľudskej povahy.
Okrem toho, že čarodejnice vytvárajú pocit tajomna a napätia, slúžia aj na komentovanie tém hry. Predstavujú nadprirodzené sily, ktoré môžu ovplyvniť ľudské správanie, a ukazujú, ako ľahko sa ľudia dajú skaziť ambíciami a mocou. Čarodejnice sú varovaním pre divákov, že nekontrolované ambície môžu viesť k tragickým následkom.